细菌渗透测试标准_细菌渗透测试

阻干态微生物穿透仪的基础知识，你想不到的全面

阻干态微生物穿透仪主要用于测量材料对人体头皮屑大小范围内的干颗粒的细菌渗透阻力。试验过程中，样品分别固定在容器上。其中5个装有枯草芽孢杆菌滑石粉的容器和1个添加未感染滑石粉的容器作为对照。在靠近时间的每个容器底部插入一个培养皿。

支撑容器的设备由气球振荡器振动，穿透样品的滑石粉全部落在培养皿上，移开培养皿进行培养。通过对生长菌落计数来评价结果。本产品负压实验系统设有风机排风系统和高效进出风过滤器，确保操作人员的安全。

阻干态微生物穿透仪的主要组成部分都有哪些呢？

1、气动球式振荡器：外部气源通过气动球振荡器。经过相应的调整和修正，振动频率保持在目标频率。它能以650n的力每分钟产生20800次振动。

2、压缩空气流量计：主要是为了测量每分钟产生20800347Hz、次振动频率的气流。

3、试验容器：仪器有6个不锈钢测试容器，顶部有金属活塞。金属活塞可通过盖上的中心孔插入盖下10 mm处，插入后试件不松脱。同时，每个容器底部的附件有一个狭缝，用来插入培养皿。

4、大理石板：采用400mm*400mm面积和10mm厚的大理石作为整个仪器的操作平台。

5、固定板：带有6个孔的不锈钢板，用夹具将其固定于石板上，用于固定安装试验容器

6、橡胶支撑：带有4个橡胶支撑，用于调节水平，固定仪器位置，防止移动。

阻干态微生物穿透仪的工作原理大量实例表明，细菌会通过干燥的有机或无机颗粒（如皮屑或干净的衣服上携带细菌）穿透屏蔽材料，而携带细菌的颗粒在储存期间会渗透到包装材料中。干微生物渗透测试仪可用于测量细菌对人体头皮屑大小范围内的干颗粒的渗透性。

P.350细菌检验基本技术

微生物细胞含大量水分（一般在80%~90%以上） ，绝大多数必须染色，才能显微镜观察。

借助物理因素和化学因素的作用进行

细菌的 等电点较低，pH在2~5之间 ，故在中性、碱性、弱酸性溶液中，u菌体蛋白质/u电离后带 负电荷 ；而碱性染料电离时u染料离子/u带 正电 。

所以，细菌学上常用 碱性染料 染色。

染色操作程序：u制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检/u

主要依据：

油浸物镜、观察完毕、u先用擦镜纸/u擦去镜头上的油、在用擦镜纸蘸少许 乙醚乙醇混合液（乙醚2份、无水乙醇3份）or二甲苯 ，擦去残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2~3下（朝一个方向）

普通光学显微镜u不能观察细胞和细菌的亚结构。/u

设计原理： 丁达尔现象

光源的中央光束被阻挡、散射的光线投入物镜、整个视野是黑暗的。

暗视野中观察到的是 被检物体的衍射光图像 、并非物体本身、所以只能看到物体的 存在和运动 ，（ 不能 辨清物体的 细微结构 ）。用于→未染色标本的u活的/u细菌、真菌，并可观察活细胞内的 线粒体及细菌鞭毛的运动 。观察 螺旋体 时多用暗视野显微镜。

暗视野聚光器→显微镜的聚光器支架上、显微镜灯照明， 聚光器和标本片之间要加一滴u香柏油/u 。目的：避免聚光镜全反射。

将光线通过透明标本细节产生的 光程差（相位差）转化为光强差 的特种显微镜。

适用于对u活体细胞生活状态下的生长、运动、增殖情况及 细微结构 /u的观察。

放上绿色滤光片

高发光效率的点光源→滤色系统→一定波长的光u（紫外光365nm、紫蓝光420nm）作为激发光/u→激发标本内的荧光物质发射出荧光。

敏感性高、用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。

荧光光源一般采用 超高压汞灯（50~200W）、激发滤片（紫外、紫色、蓝色、绿色） 、阻断（或压制）滤光片

按光路区分

传统细菌：指人工培养基上易于增殖的细菌

“三段划线” 、目的：使细菌分散、生长为 单个菌落 、便于挑选目标细菌

类型：

烛缸、严格的分离操作-处理标本开始无氧的手套箱

使用特殊的培养基：添加胆固醇、马血清、酵母提取物、抗生素等。液体-添加酚红指示剂

固体培养基、5%CO2、37℃、 7日后用60倍低倍镜 斜投射光 观察是否生长、一般 3周左右 长成菌落。菌落中心 陷入平皿生长、“油煎蛋”样

支原体菌落坚实、无法挑取、灭菌 刀片切取菌落琼脂块 →移入液体培养基→棕红色变为黄绿色提示生长、支原体小→液体培养不会明显浑浊

反复2~3次。

L型→细胞壁缺损的细菌

在普通渗透压下、细胞壁缺损的细菌会“涨破”死亡→分离L型的培养基必须 高渗透压 。

u琼脂浓度0.5%（ 0.3 0.5%半固体、1.5% 2.5%固体 ）以下的半固体培养基，加马血清及10%蔗糖维持渗透压/u（3%~5%NaCL？）L型可生长成 “油煎蛋”样细小菌落 。

专性细胞内寄生菌、必须动物及细胞分离

姬姆尼茨、吉姆萨染色

常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠

注射：皮下、腹腔、静脉or特殊器官（如颅内接种）

已分离的病原菌在保存过程中突变→丧失致病能力→制成悬液u接种于动物→重新从动物分离出来→成为完整毒力的培养物/u，过去是保存病原菌的常规做法→ 菌株的“复壮” （实际上是利用动物的疾病过程，将残留的具有毒力的致病细菌从大量无毒力的突变细菌中重新 分离出来 ）

最常用-革兰染色、特殊反应-荚膜肿胀试验等

霍乱弧菌鉴定：噬菌体-生物学分型

单克隆抗体检测特异性抗原：凝集试验、ELISA、免疫荧光试验、胶体金免疫吸附试验等

最常用实验同四

比抗原检测敏感性更高

通常使用 动物试验 。半数致死量为指标。

每 一次分离过程 、获得的纯培养物→称作 一“株” 该种细菌

所保存的培养物→称为该种细菌的“菌种”。

将细菌增殖到所需数量→这一过程称为“培养”。

渗透测试有哪些

渗透测试分为两种基本类型，白盒测试和黑盒测试。

1、白盒测试

也被称为白帽测试，是指渗透测试者在拥有客户组织所有知识的情况下所进行的测试。

使用白盒测试，需要和客户组织一起工作，来识别出潜在的安全风险。

白盒测试的最大好处是测试者将拥有所有的内部知识，并可以在不需要害怕被阻断的情况下任意地实施破坏。

而白盒测试最大的问题在于无法有效地测试客户组织的应急响应程序，也无法判断出他们的安全防护计划对检测特定攻击的效率。

白盒测试适用于时间比较紧急，或是特定的渗透测试环境，如情报收集并不在范围之内的测试场景。

2、黑盒测试

模拟一个对客户组织一无所知的攻击者所进行的渗透攻击。

经过授权的黑盒测试是设计成为模拟攻击者的入侵行为，并在不了解客户组织大部分信息和知识的情况下实施的。

黑盒测试可以用来测试内部安全团队检测和应对一次攻击的能力。

黑盒测试比较费时，同时对技术要求比较高。在安全业界的渗透测试眼中，黑盒测试能更逼真地模拟了一次真正的攻击过程。

黑盒测试依靠测试人员的能力探测获取目标系统的信息，作为一次黑盒测试的渗透测试者，通常不需要找出目标系统的所有安全漏洞，而只需要尝试找出并利用可以获取目标系统访问权代价最小的攻击路径，并保证不被检测到。

NPN法测细菌外膜渗透性中non溶于乙醇吗

10 uM NPN CK、革兰氏阴性菌CK、buffer、buffer+NPN荧光值都很低，革兰氏阴性菌+NPN、药物+NPN+革兰氏阴性菌荧光值差不多一样高，而革兰氏阳性菌+NPN荧光值也很低，不知道是什么原因了，难道终浓度1%乙醇对革兰氏阴性菌有杀菌、抑菌作用？有报道说5%乙醇能杀菌，谢谢啦